ПЦР-боксы: Правильный выбор влияет на точность ПЦР

ПЦР-боксы предназначены для эффективного обеззараживания растворов, реагентов и оборудования до и во время проведения полимеразной цепной реакции. Как следствие они оказывают влияние на повышение точности ПЦР диагностики.

Как работают ПЦР-боксы

ПЦР боксы можно разделить на три вида. Они могут работать как рабочие зоны с неподвижным воздухом или с рециркуляцией воздуха или как боксы для стерильных работ c ламинарным потоком. Для создания абактериальной среды ПЦР боксы имеют встроенную ультрафиолетовую лампу (λ = 253,7 нм). Открытый УФ облучатель позволяет оператору стерилизовать пробирки, колбы и пипетки между манипуляциями ПЦР.

Методическими указаниями МУ 1.3.2569—09 определены принципы организации работы ПЦР-лаборатории. В составе лаборатории рекомендованы боксы микробиологической безопасности (БМБ) II или III класса защиты и “настольные боксы с бактерицидной лампой (ПЦР-бокс; УФ-бокс)” (c 38, Приложение 3). В России при работе с ДНК пробами в основном используются невентилируемые и боксы с УФ рециркуляторами, а ПЦР-боксы с HEPA-фильтрами распространения не получили.

Невентилируемые стерильные боксы представляют собой закрытое рабочее пространство с УФ лампой для обеззараживания внутренних поверхностей и денатурации следов ДНК / РНК между манипуляциям оператором.

Боксы для стерильных работ с рециркуляцией дополнительно имеют закрытый УФ рециркулятор, который во время проведения ПЦР-диагностики постоянно дезинфицирует воздух внутри рабочей зоны.

Боксы для стерильных работ с ламинарным потоком сочетают в себе чистую зону класса 5 по ISO со стерилизацией УФ-светом для минимизации перекрестного загрязнения образцов, например, при раскапывании реакционной смеси. В этих боксах очищенный HEPA-фильтром воздух спускается к рабочей поверхности в виде вертикального однонаправленного потока. Аналогом зарубежных боксов для стерильных работ с HEPA-фильтром могут служить ламинарные боксы Ламинар-С LORICA, но они без защитного экрана рабочего проема.

Практические соображения по выбору

При выборе подходящего ПЦР-бокса стоит принять во внимание несколько практических соображений: конкретное применение; второй момент: размеры рабочего пространства; следующий: удобство работы с УФ облучателем и смотровым окном; четвертый важный момент: наличие разрешительных документов, гарантийный срок, цена.

Применение ПЦР-боксов

Прежде всего, следует знать конкретное применение, для которого разработан бокс. Это невентилируемые и боксы с УФ рециркулятором. Например, зарубежные производители выпускают стерильные боксы с учетом особенностей для конкретных применений.

ЗАО “Ламинарные системы” предлагает бокс абактериальной воздушной среды БАВ-ПЦР-Ламинар-С без циркуляции и бокс с УФ-рециркулятором.

Labconco™ предлагает невентилируемые Purifier™ Non-Ventilated и стерильные боксы с ламинарным потоком Labconco Purifier™ Filtered. Они предназначены для общего назначения и не защищают оператора.

Grant Instruments и Biosan предлагают очень простые УФ-боксы для стерильных работ UVC/T-M-AR Economy PCR UV Cabinet из нержавеющей стали для проведения краткосрочных процедур.

Например, ПЦР-боксы 825-PCR и 825-PCR / HEPA от Plas-Labs ™, Inc. эффективны для защиты оператора от излучения радиофармацевтическими препаратами с изотопами 32P, бета-лучей, но не гамма-лучей.

ПЦР боксы 825-PCR от Plas-Labs ™ Inc. с защитой от бета-лучей
Переднее смотровое стекло толщиной 13 мм защищает от бета-лучей

Кроме того, в конце статьи есть интересная информация по материалу http://radiopharma.ru о применении защитного экрана в ламинарном боксе в отделе ядерной медицины больницы Каср Эль Айни в Каире, Египет.

Размеры рабочей зоны ПЦР-боксов

Второй важный момент: доступная рабочая зона бокса для размещения расходных материалов и оборудования и удобства работы при проведении ПЦР-диагностики. Кроме того нужно учесть наличие свободного места в лаборатории для установки бокса. Обычно ПЦР-боксы настольные, поэтому подставку при необходимости нужно заказывать отдельно, и имеют ширину рабочей зоны от 65 см до 120 см.

ЗАО “Ламинарные системы” предлагает настольный шкаф для ПЦР БАВ-Ламинар-С с шириной рабочей камеры 102 см и глубиной 55 см. Подставку можно заказать отдельно.

Боксы Labconco™ Purifier™ имеют рабочую зону трех размеров в ширину 57, 88, 119 см и глубиной 59 и 64 см.

Настольные боксы для стерильных работ Biosan UVC/T компактные и имеют ширину рабочей поверхности 65 см, а глубину 49 см.

Удобство работы с УФ облучателем

Третье практическое соображение: удобство работы с УФ облучателем и конструкция смотрового окна. Большинство моделей имеют цифровой таймер, автоматическое отключение для защиты оператора от излучения, и УФ лампу с расположением в верхней части рабочей зоны.

В шкафах для ПЦР диагностики БАВ-ПЦР-Ламинар-С ультрафиолетовая лампа находится на защитном экране рабочего проема и в нерабочем состоянии задвигается под столешницу. Распашное лицевое стекло фиксируется полностью в открытом состоянии для удобства обработки внутреннего пространства бокса.

Боксы Labconco Purifier™ предлагаются с цифровым таймером для установки времени УФ излучения с восемью настройками на 5, 10, 15, 30, 60, 120 и 240 мин. Защитный экран во время работы оператора располагается сверху.

ПЦР-боксы  Labconco Purifier™Non-Ventilated
Во время работы оператора защитный экран находится сверху
ПЦР-бокс  Labconco Purifier™ с включенным УФ облучателем
Шкаф для ПЦР с установленным защитным экраном и включенным УФ облучателем

Разрешительные документы на ПЦР-боксы

Четвертый важный момент: наличие разрешительных документов на выбранный ПЦР-бокс, например, регистрационного удостоверения Росздравнадзора. Целесообразно обратить внимание на гарантийный срок, и сравнить цены разных производителей.

Перспективы

Поскольку ПЦР боксы оказывают влияние на повышение точности ПЦР диагностики и рекомендованы регулирующими органами разных стран, ожидается, что и в будущем они будут активно применяться.

В заключении, представляем интересный материал из статьи: Радиофармацевтические препараты: производство и доступность. На фотографии приготовление меченых изотопом лейкоцитов для визуализации инфекции в асептических условиях в ламинарном боксе 2 класса защиты с нештатным защитным экраном. Отдел ядерной медицины больницы Каср Эль Айни в Каире, Египет.

Ламинарный бокс 2 класса с защитой от радиационного облучения в отделе ядерной медицины Каср Эль Айни, Каир, Египет
Работа с радиофармацевтическими средствами в ламинарном боксе в отделе ядерной медицины Каср Эль Айни, Каир, Египет.

Список литературы и материалов

МУ 1.3.2569—09 Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I—IV групп патогенности. Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010.—51 с.

Lina Genovesi, Ph.D., JD, is a Technical, Regulatory, and Business Writer based in Princeton, NJ. PCR Enclosures: Essential for Improving PCR Accuracy.

Алексей Левчук Радиофармацевтические препараты: производство и доступность. // http://radiopharma.ru, 2018.

Полимеразная цепная реакция // Wikipedia®

Leave a Comment